PMSF使用过程常遇到问题解答

2023-03-09

1.PMSF在水中会发生什么现象?
苯基甲基磺酰氟的溶解度是有限的,在水溶液中极不稳定。应该在使用前立即将其添加到缓冲区中。苯甲基磺酰氟水溶液在pH值为8时的半衰期约为30分钟。
2.PMSF有危险吗?
苯基甲基磺酰基氟化物是一种细胞毒性化学物质,只能在通风柜或经认证的生物实验台中使用。
3.有没有无毒的替代品?
AEBSF4-[2-氨基乙基]-苯磺酰氟化物、盐酸盐或Pefabloc)是一种无毒替代品。是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,使用浓度与PMSF相同,但在水缓冲溶液中无毒且稳定。
4.如何制定PMSF实验方案?
储备溶液通常用无水乙醇、异丙醇或二甲基亚砜配制。苯基甲基磺酰氟也可溶于乙醚、苯、(无水2-丙醇(200 mM)、无水甲醇(200 mC)和无水乙醇(200 mT)。在0.1至1 mM最终浓度的大多数蛋白质溶液中有效。以17.4 mg/mL(100 mM)的速度将PMSF溶于异丙醇中,并在-20°C下保存在等分溶液中。
称出17.4mg PMSF抑制剂
加入异丙醇至10ml,溶解。
③无需过滤或消毒。
等分并储存于20°C。
5.PMSF产品是否需要特殊处理?
①苯基甲基磺酰氟具有细胞毒性和吸湿性,应避光保护。
如果增加pH值和温度,这种抑制剂会发生什么变化?
失活率随着pH值的增加而增加,并且在25°C时比在4°C时更快。
6.这种抑制剂的半衰期是多少?
20mM PMSF水溶液在pH 8.0下的半衰期约为35 min。
7.苯甲基磺酰氟的结合位点是什么?
抑制剂与丝氨酸蛋白酶中的活性位点丝氨酸残基特异性结合,但不与蛋白质中的任何其他丝氨酸残体结合。
8.PMSF能用于X射线晶体学吗?
该抑制剂与活性丝氨酸残基处的酶共价结合,可通过X射线结晶学观察到该酶;因此,该抑制剂可以作为一种化学标记来识别酶中的必需活性位点丝氨酸。